包涵體蛋白溶解及復性試劑盒 

貨號：BES21411KB

規格：50T

保存條件：RT 保存，保質期 1 年。

產品內容：

產品說明：

本產品用 E.coli 作為宿主表達得到的重組蛋白往往會形成包涵 體，其中的重組蛋白質只完成部分折疊，還沒形成最后的正確空間結構，所以沒 有生物活性，要得到有活性的重組蛋白，還需要后續的溶解和復性（重折疊）處 理。

采用溫和法溶解包涵體，釋放的包涵體蛋白質不徹底變性，還能保持其部分 折疊的結構，使后續的復性處理效率提高。

本試劑盒足夠 100 次小規模（1mL 規模）的蛋白質復性實驗。

操作步驟：

一：洗滌包涵體

說明：用常規方法得到的包涵體常常含有去污劑和細胞碎片，因此需要經過充分 的洗滌才能用于本實驗。

1. 將 10mg 包涵體沉淀溶解在 5mL 包涵體洗滌液中，超聲波處理 8-10 次 或充分吹打混勻。可以適當留取 10-30uL 作為 SDS-PAGE 電泳樣品待用。

2. 4℃ 12000 rpm 離心 20 分鐘后棄上清。

3. 重復上面的洗滌步驟 3 次，每次留取 10-30uL 作為 SDS-PAGE 電泳樣品 待用。

4. 將包涵體沉淀溶解在 1 mL 包涵體洗滌液中，超聲波處理 8 -10 次或充分 吹打混勻。

5. 檢查包涵體的純度：將上步得到的包涵體溶液和前幾步得到的預留樣品 一起用于 SDS-PAGE 電泳，檢查每次洗滌去除雜帶的情況。

6. 檢查包涵體的濃度：用自備的 BCA 蛋白檢測試劑盒測試第 4 步得到的 包涵體溶液的蛋白質濃度。

7. 將第 4 步得到的包涵體溶液的蛋白質濃度調到 5-10 mg/mL(如果低于此 范圍，則離心后用適量的洗滌液再溶解；如果高于此范圍，則用洗滌液稀釋)，然 后均分到 10 個 1.5 mL 塑料離心管中，每管 100 uL。

8. 4℃ 12000 rpm 離心 20 分鐘后棄上清。

9. 所得沉淀即純化的待用的包涵體。

二：確定溶解包涵體的最佳條件

1. 標記上步得到的 10 個離心管，并分別加入 10 種包涵體溫和溶解液， 每種 1mL。注意：準確記錄它們的對應關系。

2. 充分振蕩后，室溫放置 30 分鐘。

3. 450 nm 檢測渾濁度并記錄下數據。

4. 4℃ 12000 rpm 離心 10 分鐘后收集上清，此即包涵體溶解液。

5. 用 0.22 um 注射器式濾膜過濾包涵體溶解液。

6. 280 nm 檢測包涵體溶解液的光吸收。

7. 溶解液溶解包涵體能力跟包涵體溶液濁度跟成反比，跟包涵體溶解液中 OD280 數值成正比。根據上面的數據即可確定哪種溶解液對實驗中所用包涵體 具有最佳溶解能力，并將在此溶解液中溶解的包涵體溶解液用于下面的復性實 驗。大量處理需要從本公司單獨大量訂購包涵體溫和型溶解液 10 種中的 1 種。

三：包涵體蛋白的復性

1. 在 2.5 mL 4℃預冷的、處于輕柔攪拌中的復性緩沖液中，逐滴加入上步得 到的包涵體溶解液。

2. 待所有包涵體溶解液都加完后，將包涵體蛋白復性溶液用孔徑為 0.22 um 注射器式濾膜過濾，除去包涵體（直徑一般在 0.5-0.8 um）和大的聚合物。

3. 將得到的溶液用于活性檢測或離子交換柱層析和分子篩層析。

注意事項：該產品僅供科研實驗使用，未經允許不得用于其它用途！以實際收貨產品說明書為準，網站說明書僅供參考。

注意事項：該產品僅供科研實驗使用，未經允許不得用于其它用途！以實際收貨產品說明書為準，網站說明書僅供參考。