Human Chikungunya Virus IgM (CHIKV IgM) ELISA KIT

人基孔肯雅熱病毒IgM(CHIKV IgM)ELISA檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介：

基孔肯雅熱是由基孔肯雅病毒（CHIKV）引起的一種感染。該病于1952年在坦桑尼亞首次被發(fā)現(xiàn)，其名稱來源于基馬孔德語中表示“身體扭曲變形”的詞匯。由于基孔肯雅熱迅速的地理范圍擴(kuò)張、反復(fù)暴發(fā)、缺乏有效的抗病毒治療方法以及可能導(dǎo)致高發(fā)病率，該病已成為全球關(guān)注的公共衛(wèi)生問題?；卓涎挪《九c奧尼翁尼翁病毒（ONNV）密切相關(guān)，兩者具有相似的遺傳和臨床特征。其癥狀包括發(fā)熱和關(guān)節(jié)疼痛。這些癥狀通常在感染后兩到十二天出現(xiàn)。其他癥狀可能還包括頭痛、肌肉疼痛、關(guān)節(jié)腫脹和皮疹。癥狀通常在一周內(nèi)得到改善；然而，偶爾關(guān)節(jié)疼痛可能會持續(xù)數(shù)月或數(shù)年。死亡率約為千分之一。幼兒、老年人以及患有其他健康問題的人群面臨更嚴(yán)重疾病的風(fēng)險。

實驗原理：

本試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被有人基孔肯雅熱病毒抗原的微孔中，依次加入樣本、陽性對照、陰性對照、HRP標(biāo)記的二抗，中間經(jīng)過溫育和洗滌，用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶(HRP)的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣本中的人基孔肯雅熱病毒IgM(CHIKV IgM)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），判斷樣本陰陽性。

實驗類型： 間接法

檢測范圍：定性檢測（特殊要求可定制）

靈敏度：-

別名：CHIKV IgM

保存溫度： 2-8℃   有效期：6個月

樣本類型： 血清、血漿、和其他生物液體

試劑盒組分: （保存溫度4℃）

本試劑盒用于血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液及其它生物體液。 

標(biāo)本收集與試劑準(zhǔn)備: 

1. 血清、血漿樣本收集應(yīng)使用一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝均可），血清、血漿避免使用溶血，高血脂標(biāo)本，標(biāo)本懸浮物應(yīng)離心去除，使標(biāo)本清澈透明。待測樣本應(yīng)盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或-80℃）保存，避免反復(fù)凍融。

2. 洗滌液配置：用蒸餾水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的蒸餾水）

3. 標(biāo)準(zhǔn)品配制：取7個1.5ml離心管，分別標(biāo)注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。從第一至七管中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液200ul。在第一管中加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液200ul，置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出200ul，移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第六管中吸出200ul棄去，第七管為空白對照。

4.

5. 生物素化抗體工作液配置:使用前20分鐘，用生物素化抗體稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×工作液，根據(jù)所需用量配置，當(dāng)日使用，剩余棄之。

6. TMB顯色液的配置：使用前10分鐘，將TMB顯色液A液和B液1：1混合，避光放置備用。

7. 如果您檢測的樣本中靶蛋白濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，建議重新檢測，請根據(jù)實際情況，適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實驗，以確定稀釋倍數(shù))。

檢測程序:

1. 加樣：空白孔加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液，其余孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品50ul，將反應(yīng)板混勻后置37℃，40分鐘。

2. 洗板：用1×洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震蕩/浸泡1-2分鐘，向濾紙上印干。

3. 空白孔加入100ul生物素化抗體稀釋液，其余孔各加入1×的生物素化抗體工作液100ul，混勻后置37℃，30分鐘。

4. 洗板：同上。

5. 每孔加入SABC復(fù)合物工作液100ul，混勻后置37℃，20分鐘。

6. 洗板：同上。

7. 每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混勻后置37 ℃暗處反應(yīng)10-20分鐘（具體顯色時間根據(jù)顯色結(jié)果而定）。

8. 每孔加入100ul終止液，混勻，30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。

結(jié)果判斷與計算：

1. 所有OD值建議減除空白值后再行計算，如空白OD低于0.1，也可以直接計算。

2. 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，手工繪制或用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品OD值計算出相應(yīng)含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。

試劑盒性能:

    1、 檢測范圍：定性檢測（特殊要求可定制）

    2、 特異性:同時可檢測重組或天然的某種蛋白或抗體，不與其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

    3、 重復(fù)性:板內(nèi)，板間變異系數(shù)均小于10%。

注意事項

1. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測時建議作雙孔檢測，每次檢測都應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 洗滌過程很關(guān)鍵，洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯誤地升高，從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能 有結(jié)晶,屬于正常現(xiàn)象，37℃水浴使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液。

3. 檢測時所有試劑都要恢復(fù)到室溫，板條開封后剩余板條需封好，放回袋中2 個月內(nèi)用完。

4. 試劑盒使用超敏TMB溶液，若顯色過深會出現(xiàn)絮狀物，屬正?，F(xiàn)象，不影響結(jié)果判讀。

5. 僅用于科研，不能用于臨床診斷！