Chikungunya Virus E1 Antigen (CHIKV E1) ELISA KIT

基孔肯雅熱病毒E1抗原(CHIKV E1)ELISA檢測試劑盒

產品簡介：

基孔肯雅熱是由基孔肯雅病毒（CHIKV）引起的一種感染。該病于1952年在坦桑尼亞首次被發現，其名稱來源于基馬孔德語中表示“身體扭曲變形”的詞匯。由于基孔肯雅熱迅速的地理范圍擴張、反復暴發、缺乏有效的抗病毒治療方法以及可能導致高發病率，該病已成為全球關注的公共衛生問題。基孔肯雅病毒與奧尼翁尼翁病毒（ONNV）密切相關，兩者具有相似的遺傳和臨床特征。其癥狀包括發熱和關節疼痛。這些癥狀通常在感染后兩到十二天出現。其他癥狀可能還包括頭痛、肌肉疼痛、關節腫脹和皮疹。癥狀通常在一周內得到改善；然而，偶爾關節疼痛可能會持續數月或數年。死亡率約為千分之一。幼兒、老年人以及患有其他健康問題的人群面臨更嚴重疾病的風險。

實驗原理：

本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被有基孔肯雅熱病毒E1抗原(CHIKV E1)捕獲抗體的微孔中，依次加入樣本、標準品、生物素標記的檢測抗體，HRP酶結合物，中間經過溫育和洗滌，用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶(HRP)的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣本中的基孔肯雅熱病毒E1抗原(CHIKVE1)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD值），計算樣本濃度。

特異性：可檢測樣本中的CHIKV E1，且與其類似物無明顯交叉反應。

實驗類型： 雙抗體夾心法

檢測范圍：1.56-100ng/mL（特殊要求可定制）

靈敏度：0.65ng/mL

別名：CHIKV E1

保存溫度： 2-8℃   有效期：6個月

樣本類型： 血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清液和其他生物液體

試劑盒組分: （保存溫度4℃）

本試劑盒用于血清、血漿、組織勻漿、細胞培養上清液及其它生物體液。 

標本收集與試劑準備: 

1. 血清、血漿樣本收集應使用一次性的無熱原，無內毒素試管（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝均可），血清、血漿避免使用溶血，高血脂標本，標本懸浮物應離心去除，使標本清澈透明。待測樣本應盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或-80℃）保存，避免反復凍融。

2. 洗滌液配置：用蒸餾水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的蒸餾水）

3. 標準品配制：取7個1.5ml離心管，分別標注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。從第一至七管中分別加入標準品/樣品稀釋液200ul。在第一管中加入標準品溶液200ul，置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出200ul，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第六管中吸出200ul棄去，第七管為空白對照。

4.

5. 生物素化抗體工作液配置:使用前20分鐘，用生物素化抗體稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×工作液，根據所需用量配置，當日使用，剩余棄之。

6. TMB顯色液的配置：使用前10分鐘，將TMB顯色液A液和B液1：1混合，避光放置備用。

7. 如果您檢測的樣本中靶蛋白濃度高于標準品最高值，建議重新檢測，請根據實際情況，適當倍數稀釋(建議做預實驗，以確定稀釋倍數)。

檢測程序:

1. 加樣：空白孔加入50μl標準品/樣品稀釋液，其余孔各加入標準品或待測樣品50ul，將反應板混勻后置37℃，40分鐘。

2. 洗板：用1×洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震蕩/浸泡1-2分鐘，向濾紙上印干。

3. 空白孔加入100ul生物素化抗體稀釋液，其余孔各加入1×的生物素化抗體工作液100ul，混勻后置37℃，30分鐘。

4. 洗板：同上。

5. 每孔加入SABC復合物工作液100ul，混勻后置37℃，20分鐘。

6. 洗板：同上。

7. 每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混勻后置37 ℃暗處反應10-20分鐘（具體顯色時間根據顯色結果而定）。

8. 每孔加入100ul終止液，混勻，30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。

結果判斷與計算：

1. 所有OD值建議減除空白值后再行計算，如空白OD低于0.1，也可以直接計算。

2. 以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，手工繪制或用軟件繪制標準曲線，根據樣品OD值計算出相應含量，再乘上稀釋倍數即可。

試劑盒性能:

    1、 檢測范圍：1.56-100ng/mL（特殊要求可定制）

    2、 特異性:同時可檢測重組或天然的某種蛋白或抗體，不與其它細胞因子有交叉反應。

    3、 重復性:板內，板間變異系數均小于10%。

注意事項

1. 在試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙孔檢測，每次檢測都應做標準曲線。

2. 洗滌過程很關鍵，洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高，從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能 有結晶,屬于正常現象，37℃水浴使結晶完全溶解后再配制洗滌液。

3. 檢測時所有試劑都要恢復到室溫，板條開封后剩余板條需封好，放回袋中2 個月內用完。

4. 試劑盒使用超敏TMB溶液，若顯色過深會出現絮狀物，屬正常現象，不影響結果判讀。

5. 僅用于科研，不能用于臨床診斷！